隨著現(xiàn)代研究人員越來越多地使用高價(jià)值的小容量樣品，對先進(jìn)移液技術(shù)/協(xié)議的需求是顯而易見的。為了準(zhǔn)確檢測小樣本量的微觀變化，試管和小瓶正逐漸被微孔板取代，微孔板需要微升/納升范圍內(nèi)的試劑。

在處理小容量時(shí)，溫度和分配精度等因素對于控制和操作至關(guān)重要。如果您希望在使用少量液體時(shí)獲得一致的結(jié)果，您需要識別并消除所有潛在的錯(cuò)誤來源，并定期檢查您的實(shí)驗(yàn)室工作流程。這適用于因使用錯(cuò)誤的移液儀器和不準(zhǔn)確的移液技術(shù)而導(dǎo)致的錯(cuò)誤。以下是準(zhǔn)確移液小容量的一些技巧。

使用正確的移液器和移液器吸頭

由于容量誤差在低樣本量時(shí)更為突出，因此選擇能夠提供與研究方案一致的樣本量的移液器非常重要。確保選擇盡可能小的移液器來處理樣品容量。例如，如果您要移取 1 μL 樣品，請使用2-5 μL 移液器，而不是 20 μL 移液器。

此外，您需要知道是否為您的工作流程使用了正確類型的移液器。例如，容積式移液器非常適合處理揮發(fā)性、粘性和其他類型的難處理樣品。建議您在選擇適合您的實(shí)驗(yàn)需要的移液器類型時(shí)閱讀制造商的說明手冊。實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的大多數(shù)錯(cuò)誤是由于液體揮發(fā)性或粘度以及意外的環(huán)境變化引起的。您必須確保您的移液技術(shù)與周圍條件、樣品類型和樣品量相一致。

使用正確的移液技術(shù)

在使用特定的移液技術(shù)處理較小的液體容量時(shí)，有各種注意事項(xiàng)。例如，您需要確保將移液器保持在適當(dāng)?shù)拇怪蔽恢?，并將移液器從樣品容器中筆直拉出，同時(shí)避免接觸容器的側(cè)面。

對于小于 50 μL 的樣品容量，應(yīng)避免以一定角度握持移液器，因?yàn)樗鼤淖円后w的吸液量。此外，如果您讓移液器吸頭接觸容器的側(cè)面，它會產(chǎn)生一個(gè)芯吸過程，從而降低分配的液體量。

此外，重要的是您在吸液后和從液體中取出吸頭之前要始終保持暫停。此外，嘗試使用一致的柱塞壓力和速度。 平穩(wěn)地壓下柱塞，直到它停止，浸入移液器吸頭，然后以恒定速率釋放它。建議這樣做，因?yàn)檫@樣的重復(fù)操作可能會產(chǎn)生可重復(fù)的結(jié)果。

考慮各種環(huán)境溫度

您需要確保在設(shè)計(jì)移液工作流程時(shí)考慮到各種環(huán)境因素，包括實(shí)驗(yàn)室的溫度、壓力和濕度水平。專家建議您不應(yīng)在低于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度的溫度下移液小容量。實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度將直接影響儀器移液樣品的精確容量，因?yàn)檩^高溫度引起的熱膨脹可能會增加樣品和移液器吸頭之間的空氣空間，并顯著減少分液容量。

在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中平衡小容量樣品有助于顯著減少容量誤差，并防止冷液體的過度分配。此外，您可以在處理極冷或極熱的液體時(shí)使用正排量移液器，以保持更高水平的精確度和準(zhǔn)確度。

預(yù)潤濕移液器吸頭

為了正確吸取和分配小容量樣品，您必須在開始移液工作流程之前預(yù)先潤濕移液器吸頭。預(yù)潤濕主要涉及在執(zhí)行后續(xù)移液步驟之前將移液器吸頭浸入液體中。

盡管使用了經(jīng)過驗(yàn)證的移液技術(shù)，但未能預(yù)先潤濕移液器吸頭會導(dǎo)致蒸發(fā)增加和輸送量減少。預(yù)潤濕移液器吸頭使您能夠通過增加腔室內(nèi)的濕度水平來分配準(zhǔn)確和精確的液體量，從而在移液過程中限制液體蒸發(fā)。

使用正確的浸入深度

在吸氣之前，將吸頭正確浸入半月板下方很重要。對于大容量移液器 (1-5 mL)，浸入深度應(yīng)至少為 5-6 mm，而對于較小容量移液器，深度應(yīng)在 2-3 mm 左右。

如果您將其浸入得太少，特別是大容量移液器，可能會導(dǎo)致吸入空氣。另一方面，如果您將其浸入過多，它會使液體粘在移液器吸頭表面，從而導(dǎo)致容量誤差。

如果您忽略上述任何變量，錯(cuò)誤潛入您的工作流程的機(jī)會可能會急劇增加，從而導(dǎo)致結(jié)果不可靠。隨著樣品容量越來越小，其物理特性、環(huán)境溫度和移液技術(shù)的影響變得越來越突出，使得移液工作流程變得相當(dāng)艱巨。遵循最佳實(shí)踐并注意幾個(gè)關(guān)鍵方面可能會改進(jìn)您的移液技術(shù)并幫助您獲得所需的高度準(zhǔn)確的結(jié)果！

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