貼壁細胞通常在平面表面上培養(yǎng)，例如由細胞培養(yǎng)皿或燒瓶提供的表面。通過培養(yǎng)基進行氣體和營養(yǎng)交換，因此必須徹底優(yōu)化條件以支持細胞生長。貼壁細胞培養(yǎng)固有的問題包括附著不良、產(chǎn)量或活力受損，以及產(chǎn)生不均勻的細胞單層，這些問題在細胞擴增過程中會變得更加明顯。本文重點介紹了這些問題的一些常見原因，并提供了在常規(guī)細胞培養(yǎng)和放大過程中預防這些問題的有用建議。

貼壁細胞培養(yǎng)的挑戰(zhàn)

貼壁細胞培養(yǎng)的一個主要挑戰(zhàn)在于讓細胞附著在培養(yǎng)容器上。這在低血清或無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞時尤其成問題，因為細胞粘附和擴散通常需要血清中的附著蛋白（玻連蛋白和纖連蛋白）。另一個問題是確保為細胞提供足夠的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，以避免損害活力或引發(fā)可能在下游進一步造成問題的表型變化。細胞單層均勻分布也很重要。均勻分布不僅促進一致的細胞生長，而且還最大限度地增加了可以從培養(yǎng)容器中收獲的細胞數(shù)量。

預防常見的生長問題

通過采用貼壁細胞培養(yǎng)的最佳實踐，可以輕松克服剛剛描述的挑戰(zhàn)?？梢酝ㄟ^允許細胞多次傳代以適應血清減少或無血清條件或使用具有特殊處理表面的培養(yǎng)容器來促進附著。應仔細選擇有效的涂層，包括聚-L-賴氨酸、明膠、膠原蛋白和各種專有配方，以適應細胞類型。通過預熱和預充氣使培養(yǎng)基達到正確的 pH 值也有助于細胞更快地粘附，并且在使用較大的培養(yǎng)容器時特別有益。

由于容器大小和培養(yǎng)基體積會對氣體交換和氧氣輸送到貼壁細胞產(chǎn)生重大影響，因此必須仔細優(yōu)化培養(yǎng)基高度。培養(yǎng)基高度應足夠低，以使氧氣從頂部空間自由流動到細胞，但又應足夠高，以提供足夠的營養(yǎng)物質(zhì)來支持健康的細胞生長。通常建議使用每 cm 2生長面積 0.2–0.4 mL 生長培養(yǎng)基進行貼壁細胞培養(yǎng)。

為避免產(chǎn)生不均勻的單層，細胞接種物應在添加到培養(yǎng)容器后與培養(yǎng)基進行充分而溫和的混合。這可以通過小心地左右傾斜培養(yǎng)皿或使用大口徑血清移液管執(zhí)行幾個緩慢的抽吸和分配步驟來實現(xiàn)。在生物安全柜和培養(yǎng)箱之間更換培養(yǎng)基或移動培養(yǎng)物時，避免產(chǎn)生剪切力也很重要。當培養(yǎng)基掃過細胞時會發(fā)生剪切，導致部分單層分離。溫和的處理技術(shù)消除了這些問題，還可以幫助防止氣泡的形成，這些氣泡可以阻止新鮮接種的細胞粘附或?qū)е乱呀?jīng)附著的細胞壞死。

應用最佳實踐來擴大規(guī)模

研究人員擴大貼壁細胞培養(yǎng)的原因有很多。這些包括產(chǎn)生用于免疫測定應用（如蛋白質(zhì)印跡或 ELISA）的細胞裂解物，在單克隆抗體開發(fā)過程中擴增產(chǎn)生抗體的克隆，以及生產(chǎn)各種細胞療法。無論最終目標如何，擴大規(guī)模都要求隨著船舶規(guī)模的增加保持一致的增長；這是確保細胞特征不改變的關(guān)鍵。

典型的放大操作可能會將細胞從多孔板、細胞培養(yǎng)皿、燒瓶中取出，最終在多層燒瓶中生長。后者旨在在不占用 CO 2培養(yǎng)箱中過多空間的情況下最大限度地提高產(chǎn)量，并且現(xiàn)在可以使用允許在與傳統(tǒng) 175 cm2 燒瓶共享相同占地面積的容器中培養(yǎng)多達十層貼壁細胞的模型。其中包括 Falcon ?細胞培養(yǎng)多功能培養(yǎng)瓶（提供 525 cm 2和 875 cm 2）和 Corning ? HYPERFlask ?細胞培養(yǎng)容器（1720 cm2）。對于更大的放大容量，其他選項包括滾瓶（最大 1,750 cm2）、Corning ?CellSTACK ?培養(yǎng)室（最大 25,440 平方厘米），以及可連接到生物反應器的高度復雜的封閉灌注系統(tǒng)（最大 85,000 平方厘米）。

重要的是要記住，較小的容器可以在放大之前徹底優(yōu)化培養(yǎng)條件。例如，多孔板或培養(yǎng)皿可用于比較不同的培養(yǎng)基配方，或在細胞在燒瓶等較大容器中生長之前確定最佳接種濃度。培養(yǎng)基體積應在整個擴增過程中保持恒定（mL 培養(yǎng)基/cm2），以避免引入可能在更大范圍內(nèi)產(chǎn)生更顯著影響的變異性。

除了單層和多層燒瓶外，永岳醫(yī)療還提供各種用于貼壁細胞培養(yǎng)的容器，包括96孔板和培養(yǎng)皿。要了解更多信息，請 點擊此處